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      蛋白質分離純化抽提與蛋白質粗制品的獲得

      更新時間:2022-04-21      瀏覽:1256次
      蛋白質分離純化抽提: 
      通常選擇適當的緩沖液溶劑把蛋白質提取出來。抽提所用緩沖液的 pH、離子強度、組成成分等條件的選擇應根據欲制備的蛋白質的性質而定。如膜蛋白的抽提,抽提緩沖液中一般要加入表面活性劑(十二烷基磺酸鈉、tritonX-100 等),使膜結構破壞,利于蛋白質與膜分離。在抽提過程中,應注意溫度,避免劇烈攪拌等,以防止蛋白質的變性。
      蛋白質粗制品的獲得:
      選用適當的方法將所要的蛋白質與其它雜蛋白分離開來。比較方便的有效方法是根據蛋白質溶解度的差異進行的分離。
      常用的有下列幾種方法:
      1.等電點沉淀法
      不同蛋白質的等電點不同,可用等電點沉淀法使它們相互分離。
      2.鹽析法
      不同蛋白質鹽析所需要的鹽飽和度不同,所以可通過調節鹽濃度將目的蛋白沉淀析出。被鹽析沉淀下來的蛋白質仍保持其天然性質,并能再度溶解而不變性。
      3.有機溶劑沉淀法
      中性有機溶劑如乙醇、丙酮,它們的介電常數比水低。能使大多數球狀蛋白質在水溶液中的溶解度降低,進而從溶液中沉淀出來,因此可用來沉淀蛋白質。此外,有機溶劑會破壞蛋白質表面的水化層,促使蛋白質分子變得不穩定而析出。由于有機溶劑會使蛋白質變性,使用該法時,要注意在低溫下操作,選擇合適的有機溶劑濃度。
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