植物樹葉總蛋白組織樣品處理方法

植物樹葉總蛋白組織樣品處理方法

對多數(shù)從動物或植物組織里提取總蛋白質(zhì)而言，同樣沒有一種通用的程序。但遵循的原則基本相同。下面列出兩種提取植物樹葉總蛋白程序：

裂解液制備：

（A）,7M Urea,2M Thiourea,4%(w/v)CHAPS,40mM Tris-Base,40mM DTT,2%Pharmalyte pH3-10.

（B）,905M Urea, 2%(w/v)CHAPS, 0.8%(w/v)Pharmalyte pH3-10,1%(w/v)DTT and 5mM Pefabloc proteinase inhibitor;

三氯醋酸-苯酮沉淀法提取植物樹葉總蛋白程序：

1. 先將植物樹葉置于液氮中速凍，后放置于Gd200組織研磨儀中研碎；
2. 懸浮于含10%三氯醋酸和0.07%β-巰基乙醇的丙酮溶液，-20℃冰浴；
3. 讓蛋白質(zhì)沉淀過夜然后離心（4℃，40，000g,1h）,棄上清液；
4. 重懸沉淀浮于含0.07% β-巰基乙醇的冰預(yù)冷丙酮溶液里；
5. 離心（4℃，40，000g,1h）后真空干燥沉淀；
6. 用（A）或（B）裂解溶液溶解沉淀，離心（4℃，40，000g,1h）；
7. Brandford法定量蛋白，然后分裝保存在-78℃?zhèn)溆?/span>

超速離心法：

1. 取材；
2. 用Gd200組織研磨儀在液氮冷凍條件下將樣品研成粉末，每1g樣品加入0.5ml裂解液，使用Gd200高通量組織研磨儀研磨勻漿30s；
3. 組織懸液15℃，10,000×g離心10min；
4. 上清液4℃，150,000×g超速離心45min；
5. 小心避開上層漂浮的脂質(zhì)層，吸取離心上清6℃40,000g再次離心50min;
6. 取離心上清。Brandford法定量蛋白，分裝后置-75℃保存。